Серологический анализ антител к возбудителю псевдотуберкулеза

Серологический анализ антител к возбудителю псевдотуберкулезаСерологические исследования — методы изучения взаимодействия антигенов с антителами в сыворотке крови. Серологическая диагностика базируется на определении специфических антител, которые образуются в процессе иммунного ответа, вызванного проникновением антигена — возбудителя заболевания. Серологические реакции (реакции «антиген-антитело») применяются для определения антигенов групп крови, в диагностике заболеваний, в судебной медицине для идентификации тканевых, микробных антигенов. Название «серология» — от латинских слов serum (сыворотка) и logos (знание) — учение о сыворотке крови и ее свойствах. Серологические реакции:реакции агглютинацииреакции преципитацииреакции нейтрализацииреакции с участием комплементареакции с использованием меченых антител или антигенов- реакция агглютинации хорошо выявляет lgM-антитела, но менее чувствительна для определения lgG-антител.

— реакции связывания комплемента и гемолиза, которые требуют участия комплемента, не выявляют lgA-антитела и lgE-антитела.

Серологический анализ антител к возбудителю псевдотуберкулеза

Антиген — вещество, которое распознается организмом как чужеродное, и способное запускать иммунную (защитную) реакцию.

Антитела (иммуноглобулины -IgG, IgA, IgM, IgD, IgE) — белки, образующиеся в ответ на проникновение в организм антигена. Связываясь активными участками (антигенными детерминантами) с бактериями или вирусами, антитела препятствуют их размножению, нейтрализуют выделяемые ими токсические вещества. Реакции агглютинации.

Это реакции, основанные на феномене агглютинации — склеивании носителей антигена с помощью иммунной сыворотки к этому антигену. Корпускулярные антигены (крупные частицы — микробные клетки, эритроциты, лейкоциты и т.д., склеиваются антителами и выпадают в осадок на дно пробирки в виде иммунных комплексов в форме хлопьев или зерен, видимых невооруженным глазом).

Различают:прямые реакции агглютинации, используемые для выявления антител в сыворотке крови больного.

Реакция агглютинации бактерий с использованием соответствующей антибактериальной сыворотки относится к наиболее простым серологическим реакциям.

Взвесь бактерий добавляют к различным разведениям испытуемой сыворотки крови и через определенное время контакта при t°37° регистрируют, при каком наивысшем разведении сыворотки крови происходит агглютинация.

Реакцию агглютинации бактерий используют для диагностики многих инфекционных заболеваний: бруцеллеза, туляремии, брюшного тифа и паратифов, бациллярной дизентерии, сыпного тифа.

Реакции агглютинации для определения группы крови и резус-фактора основаны на взаимодействии аллоантител (изоантител) и антигенов эритроцитов. Для их обнаружения используют реакцию Кумбса, основанную на выявлении неполных антител с помощью антиглобулиновых сывороток.

К эритроцитам известной специфичности добавляют исследуемую сыворотку крови, антиглобулиновую сыворотку против lgG (непрямая реакция Кумбса). Fab-фрагменты неполных антител исследуемой сыворотки крови присоединяются к эритроцитам, а к свободным Fc-фрагментам этих антител присоединяются антитела против lgG, и происходит агглютинация эритроцитов.

реакция пассивной, или непрямой гемагглютинации основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами, взаимодействие которых с соответствующими антителами сыворотки крови больных приводит к образованию фестончатого осадка.

Используется для определения беременности, выявления повышенной чувствительности больных к лекарственным препаратам и гормонам; В реакции пассивной (непрямой), гемагглютинации (РПГА, РНГА) используют эритроциты или нейтральные синтетические материалы (например, частицы латекса), на поверхности которых сорбированы антигены (бактериальные, вирусные, тканевые) или антитела. Их агглютинация происходит при добавлении соответствующих сывороток или антигенов. Эритроциты, сенсибилизированные антигенами, называют антигенным эритроцитарным диагностикумом и используют для выявления и титрования антител.

Эритроциты, сенсибилизированные антителами. называют иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами и применяют для выявления антигенов.

Реакцию пассивной гемагглютинации используют для диагностики заболеваний, вызванных бактериями (брюшной тиф и паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера и др.

), простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.

), а также для определения некоторых гормонов, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, например пенициллину и инсулину.

реакция торможения гемагглютинации основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать вирусы, которые в результате теряют свойство склеивать эритроциты.

Используется для диагностики вирусных болезней; Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на феномене предотвращения (торможении) иммунной сыворотки гемагглютинации эритроцитов вирусами, используется для выявления и титрования противовирусных антител.

Она служит основным методом серодиагностики гриппа, кори, краснухи, эпидемического паротита, клещевого энцефалита и других вирусных инфекций, возбудители которых обладают гемагглютинирующими свойствами. например, для серодиагностики клещевого энцефалита в лунки панели разливают двукратные разведения сыворотки больного на щелочном боратном буферном растворе.

Затем добавляют определенное количество, обычно 8 АЕ (агглютинирующих единиц), антигена клещевого энцефалита и после 18 ч экспозиции при t°4° вносят взвесь гусиных эритроцитов, приготовленную на кислом фосфатно-буферном растворе. Если в сыворотке крови больного есть антитела к вирусу клещевого энцефалита, то антиген нейтрализуется и агглютинация эритроцитов не происходит

реакция коагглютинации — разновидность реакции агглютинации, в которой антигены возбудителя определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой.Реакции преципитации.

Преципитация происходит в результате взаимодействия антител с растворимыми антигенами. Простейшим примером реакции преципитации является образование в пробирке непрозрачной полосы преципитации на границе наслоения антигена на антитело.

Широко применяют различные разновидности реакции преципитации в полужидких гелях агара или агарозы (метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлоню, метод радиальной иммунодиффузии, иммуноэлетрофорез), которые носят одновременно качественный и количественный характер.

В результате свободной диффузии в геле антигенов и антител в зоне оптимального их соотношения образуются специфические комплексы — полосы преципитации, которые выявляют визуально или при окрашивании. Особенностью метода является то, что каждая пара антиген — антитело формирует индивидуальную полосу преципитации, и реакция не зависит от наличия в исследуемой системе других антигенов и антител

Реакция связывания комплемента (РСК) основаны на способности субкомпонента комплемента Clq и затем других компонентов комплемента присоединяться к иммунным комплексам, позволяют титровать антигены или антитела по степени фиксации комплемента комплексом антиген — антитело.

Эта реакция состоит из двух фаз: взаимодействия антигена с испытуемой сывороткой крови (исследуемая система) и взаимодействия гемолитической сыворотки с эритроцитами (индикаторная система). При положительной реакции в исследуемой системе происходит связывание комплемента, и тогда при добавлении сенсибилизированных антителами эритроцитов гемолиза не наблюдается.

Реакцию применяют для серодиагностики сифилиса (реакция Вассермана), вирусных и бактериальных инфекций.

Иммунное прилипание. Эритроциты, тромбоциты и другие клетки крови имеют на поверхности рецепторы к третьему компоненту комплемента (СЗ). Если к антигену (бактериям, вирусам и др.

) добавить соответствующую иммунную сыворотку и комплемент, то образуется комплекс антиген — антитело, покрытый СЗ-компонентом комплемента.

Эту реакцию применяют при изучении ряда вирусных инфекций (клещевого энцефалита, денге), которые сопровождаются иммунопатологическими процессами и циркуляцией в крови вирусных антигенов в комплексе с антителами.

Реакция нейтрализации основана на способности антител нейтрализовать некоторые специфические функции макромолекулярных или растворимых антигенов, например активность ферментов, токсины бактерий, болезнетворность вирусов.

В бактериологии эту реакцию используют для обнаружения антистрептолизинов, антистрептокиназы и антистафилолизинов. Реакцию нейтрализации токсинов можно оценивать по биологическому эффекту, так, например, титруют антистолбнячные и антиботулинические сыворотки.

Смесь токсина с антисывороткой, введенная животным, не вызывает их гибели. Различные варианты реакции нейтрализации применяют в вирусологии.

При смешивании вирусов с соответствующей антисывороткой и введении этой смеси животным или в клеточные культуры патогенность вирусов нейтрализуется и при этом животные не заболевают, а клетки культур не подвергаются деструкции.

Реакции с использованием химических и физических меток

Иммунофлюоресценция заключается в использовании меченных флюорохромом антител, точнее, иммуноглобулиновой фракции антител lgG. Меченное флюорохромом антитело образует с антигеном комплекс антиген — антитело, который становится доступным наблюдению под микроскопом в УФ-лучах, возбуждающих свечение флюорохрома.

Реакцию прямой иммунофлюоресценции используют для изучения клеточных антигенов, выявления вируса в зараженных клетках и обнаружения бактерий и риккетсий в мазках.

Читайте также:  Самые частые анализы крови, которые назначают врачи

На обнаружении антигенов вирусов в клетках отпечатков со слизистой оболочки носа основана экспресс-диагностика гриппа, парагриппа и аденовирусной инфекции.

Более широко применяют метод непрямой иммунофлюоресценции. основанный на выявлении комплекса антиген — антитело с помощью люминесцирующей иммунной сыворотки против lgG-антител и используемой для обнаружения не только антигенов, но и титрования антител. Метод нашел применение в серодиагностике герпеса, цитомегалии, лихорадки Ласса.

Препараты с наслоенной исследуемой сывороткой крови помещают в термостат при t° 37° для образования иммунных комплексов, а затем после отмывания несвязавшихся реагентов выявляют эти комплексы меченой люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека.

Применяя меченые иммунные сыворотки против lgM- или lgG-антител, можно дифференцировать тип антител и обнаруживать ранний иммунный ответ по наличию lgM-антител.

Серологический анализ антител к возбудителю псевдотуберкулезаИммунологические методы исследования основаны на специфическом взаимодействии антигенов и антител. Широко используются для определения групп крови, лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных заболеваний, тканевых и опухолевых антигенов, видовой принадлежности белка, распознавания аллергии и аутоиммунных болезней, беременности, гормональных нарушений, в научно-исследовательской работе. Они включают серологические исследования (реакции прямого воздействия антигенов и антител сыворотки крови).

  • При переливании крови и ее компонентов клинически значимыми являются группы крови по следующим системам:
  • — система АВ0, включающая антигены А, В;
  • — система Резус, включающая антиген Резус-принадлежности класса D и антигены эритроцитов С, с, Е, е;
  • — система Келл, включающая антигены эритроцитов класса К.

Серологический анализ антител к возбудителю псевдотуберкулеза

  1. Иммунологические методы: метод агглютинации, основанный на слипании и выпадении в осадок частиц (агглютинатов), корпускулярного антигена под воздействием антител (агглютининов) — для определения групп крови по системам АВ0, Резус-принадлежности и фенотипа антигенов эритроцитов по системам Резус и Келл; метод гемагглютинации, основанный на способности эритроцитов с адсорбированными антигенами или антителами агглютинироваться в присутствии гомологичных сывороток или соответствующих антигенов с образованием гемагглютинатов (определение Резус-принадлежности, фенотипа антигенов эритроцитов по системам Резус и Келл, скрининга антиэритроцитарных аллоантител).
  2. Группа крови по системе АВ0 определяется перед каждым взятием у донора крови или ее компонентов с использованием моноклональных антител специфичности анти-А, анти-В одной серии реактивов;повторное определение группы крови по системе АВ0 проводится из образца донорской крови, взятого во время донации перекрестным способом со стандартными эритроцитами А, В
  3. Резус-принадлежность определяется наличием или отсутствием антигена D, выявляемого при исследовании образца донорской крови, взятого во время донации;Резус-принадлежность устанавливается как положительная при наличии антигена D и как отрицательная при отсутствии антигена D; производится типирование антигенов эритроцитов С, с, Е, е системы Резус;определения антигена эритроцитов К системы Келл;скрининг антиэритроцитарных аллоантител донорской крови;устанавливается специфичность антител к антигенам эритроцитов.
  4. Метод иммунохемилюминесцентного анализа, основанный на выявлении комплекса «антиген-антитело» при взаимодействии антигенов со специфическими антителами для определения маркеров вирусов иммунодефицита человека, гепатитов В и С и возбудителя сифилиса
  5. Метод пассивной гемагглютинации, основанный на способности эритроцитов с адсорбированными растворимыми антигенами агглютинироваться в присутствии специфической иммунной сыворотки с образованием гемагглютинатов, — используется для определения маркеров возбудителя сифилиса
  6. Метод преципитации, основанный на взаимодействии эквивалентных количеств мелкодисперсных растворимых антигенов (преципитиногенов) с соответствующими антителами (преципитинами) с образованием комплекса антиген-антитело (преципитата) и последующим выпадением данного комплекса в осадок, — используется для выявления неспецифических антител к кардиолипиновому антигену при диагностике сифилиса;
  7. антитела к эритроцитарным антигенам
  8. гемолитическая болезнь новорожденных
  9. серологические реакции
  10. Гелевая технология :

Определение группы крови системы АВО (простая и перекрестная реакция). Определение группы крови системы РезусФенотипирование антигенов эритроцитов всех известных систем.

Выявление, определение активности и специфичности аллоиммунных антиэритроцитарных антител классов IgG и IgM. Определение аутоиммунизации к антигенам эритроцитов. Индивидуальный подбор эритроцитсодержащих компонентов для переливания.

Диагностика иммуноконфликтной беременности и гемолитической болезни новорожденных.

  • Иммунологические исследования (анализ крови):
  • Определение цитокинов в периферической крови Уровень интерферона и секреция его лейкоцитами (пробирка с гепарином)Определение фагоцитарной активности (пробирка с гепарином)Определение спонтанной миграции — моноцитов и нейтрофилов ( пробирка с гепарином)Окислительная активность фагоцитарных клеток (пон, вт, ср, чтв. до 1100, пробирка с гепарином)Иммуноглобулины IgE, IgM, IgG, IgAОпределение Rh-фактораОпределение антирезусных антителОпределение антирезусных антител с раститровкойОпределение антигрупповых антителОпределение совместимости крови супругов с определением группы и Rh-фактораОпределение антифосфолипидных антител (lgG+ IgM)Определение антинуклеарных антителОпределение антител к ДНКОпределение антиспермальных антител в крови (общие)Определение антиспермальных антител в сперме IgGОпределение антиовариальных антителОпределение антител к Zona pellucidaОпределение ревматоидного фактора с латексомОпределение антистрептолизина «0»Определение С-реактивного белка (качественное)Определение С-реактивного белка (количественное)
  • Исследования на сифилис:
  • Иммуноферментный анализ (IgG)Обследование на сифилис (иммуноферментный анализ) с раститровкойРеакция микроагглютинации на сифилис Исследования на гепатит А:Антитела класса IgM Исследования на гепатит В:Австралийский антиген — HBsAgНbсогАb — общиеОпределение числа копий вируса гепатита В (вирусная нагрузка) НВеАgПЦР (пробирка с ЭДТА)AнтиHBsAdb — иммуноглобулины МАнтиНВеАb
  • Исследования на гепатит С:
  • Антитела (общие)Анализ крови на антитела к NS3, NS4, NS5, corПЦР (пробирка с ЭДТА)Генотипирование вируса гепатита «С» (пробирка с ЭДТА)Определение числа копий вируса гепатита «С» (вирусная нагрузка) real-time PCR (пробирка с ЭДТА)Определение антител IgM Исследование на краснуху:Определение антител IgGОпределение антител IgAОпределение антител IgGЧувствительность к антибиотикам (эппендорф с трансп. ср)Определение антител IgM Исследования на герпес I+II типов:Определение антител к предранним белкам вируса герпеса — маркеру обострения хронической инфекцииОпределение антител к вирусу герпеса IgGИсследование на вирус герпеса 6 типа (синдром хронической усталости) методом ПЦР (пробирка с ЭДТА)Исследование на вирус герпеса 7 типа (синдром хронической усталости) методом ПЦР (пробирка с ЭДТА
  • Исследование на вирус Эпштейна-Барра:
  • Определение антител к вирусу Эпштейна-Барра, IgMОпределение антител к вирусу Эпштейна-Барра, IgGОпределение IgG к капсидному антигену
  • анализ по капле крови

Рпга с иерсиниозным и псевдотуберкулезным диагностикумом в медицинской лаборатории "оптимум" в сочи (адлер)

Серологический анализ антител к возбудителю псевдотуберкулеза Анализ выявляет наличие антител к патогену кишечного иерсинеоза и псевдотуберкулеза и является маркером острой или перенесенной ранее инфекции.

Методика РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) проводится следующим образом — на лабораторный планшет вносят тестируемые образцы — исследуемая сыворотка в первой пробе разводится в 10 раз, последующие образцы разводят с двукратным отличием (1:10, 1:20 и так далее). К каждой пробе добавляют иерсиниозный диагностикум (стандартные эритроциты, связанные с антигенами возбудителей инфекции). При наличии в пробах антител происходит их соединение с патогеном, которое проявляется осаждением гемагглютининов. То же самое проделывают и с псевдотуберкулезным диагностикумом. Позитивная реакция оценивается по разведению пробы, в которой произошла агглютинация.

Сроки выполнения до 7-10 дней
Синонимы (rus) Реакция пассивной агглютинации с грамотрицательными палочками иерсиниями
Cинонимы (eng) Indirect hemagglutination test from Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocoliticа
Методы исследования Полуколичественная реакция непрямой гемагглютинации
Подготовка к проведению анализа Анализ проводится утром, натощак. С последнего приема пищи должно пройти не менее 8 часов.
Исключить прием алкоголя не менее чем за 24 часа до взятия биоматериала.
Не рекомендуется сдавать кровь на серологию после флюорографии, рентгена, физиотерапевтических процедур.
Биоматериал и способы его взятия Кровь, взятие производят в лечебном учреждении из вены.

Серологический анализ антител к возбудителю псевдотуберкулеза Бактерии Yersinia — грамотрицательные палочки из семейства Enterobakteriaceae, переносчики инфекции — грызуны. Микроорганизмы поражают пищеварительные органы, Yersinia enterocolitica вызывает кишечный иерсиниоз, Yersinia pseudotuberculosis — псевдотуберкулез (который был назван из-за внешнего сходства клеточных бугорков, обнаруженных в тканях инфицированных животных с «туберкулезной гранулемой»). Бациллы представляют опасность для человека и животных, они обладают высокой устойчивостью к окружающим условиям, накапливаются и размножаются в почве, воде. В человеческий организм бактерии проникают при уходе за инфицированным животным и употреблении сырой воды, немытых овощей и фруктов, плохо приготовленной рыбы и мяса, некипяченого молока.

Читайте также:  Иммунологический анализ крови «ЭЛИ-Гастро-Тест»

Клинические проявления кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза очень похожи:

  • диарея;
  • лихорадка;
  • спастические боли в животе;
  • рвота;
  • увеличение лимфоузлов;
  • катаральные симптомы.

Иногда симптомы инфекционного процесса напоминают острый аппендицит. Очень часто развивается патологии почек, печени, поджелудочной железы, сердца, суставов, нервной и сосудистой системы. Тяжесть инфекционного процесса зависит от количества возбудителя, внедрившегося в организм, состояния иммунитета инфицированного, наличия сопутствующих патологий.

Отличительным признаком псевдотуберкулеза является появление скарлатиноподобных высыпаний в естественных складках (на шее, в подмышках, паху, вдоль торса), отек стоп ног и кистей рук. Именно поэтому заболевание могут называть скарлатиноподобной лихорадкой.

Сходство клинико-этиологических характеристик, механизма зарождения и развития болезни позволяет рассматривать кишечный иерсиниоз и псевдотуберкулез как близкие друг другу кишечные инфекции, различить возбудителей инфекционного процесса можно лишь при помощи лабораторных анализов.

Наиболее достоверным методом считается выявление присутствия антител к бациллам в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). Опытные специалисты инфекционисты, ревматологи, терапевты назначают анализ для:

  • уточнения диагноза псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза;
  • клинического разграничения с острыми кишечными инфекциями, а также острыми инфекционными болезнями, протекающими с характерными высыпаниями на коже и поражением многих органов и тканей.

Серологический анализ антител к возбудителю псевдотуберкулеза Исследование проводят при наличии:

  • эпидемиологических данных об очаге иерсиниозной инфекции;
  • у пациента симптомов реактивного артрита, болезни Бехчета (системного васкулита), уретроокулосиновиального синдрома.

Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии заражения иерсиниями. Условно-диагностическим титром считают итог 1:160 и выше — положительный результат, подтверждающий текущее заболевание.

Рекомендуют двукратное проведение анализа — при появлении первых клинических признаков и через неделю. Окончательный диагноз инфекционного процесса устанавливает квалифицированный специалист.

Сдать кровь на антитела к возбудителю псевдотуберкулеза в медицинском центре диагностики, профилактики и лечения ЭндоМедЛаб в Ярославле

Главная / Цены / Цены на анализы Серологический анализ крови позволяет обнаружить в организме пациента иммунные антитела к Yersinia pseudotuberculosis (возбудителю дальневосточной скарлатино-подобной лихорадки или псевдотуберкулеза).

Исследование проводится для диагностирования инфекционного процесса и клинического разграничения острых кишечных инфекций. Серологический анализ антител к возбудителю псевдотуберкулезаПсевдотуберкулез является острым зоонозным (передающемся человеку от животного) инфекционным заболеванием. Основные хозяева болезнетворной бактерии – грызуны, сельскохозяйственные животные и птицы. В человеческий организм возбудитель инфекции проникает при употреблении недостаточно обработанных продуктов животного происхождения – молока, яиц, мяса.

Инкубационный период длится не более четырех дней. Патологический процесс начинается остро – больной жалуется на:

  • лихорадку;
  • болезненные ощущения в животе;
  • тошноту, вплоть до рвоты;
  • диарею;
  • увеличение лимфоузлов;
  • гепато-спленомегалию;
  • мышечную и суставную боль;
  • покраснение и отечность лица, стоп, кистей;
  • мелкопятнистые высыпания на кожных покровах.

С момента заражения в организме человека производятся специфические иммунные антитела, направленные на уничтожение инфекционных агентов. Быстрый рост их концентрации можно наблюдать на протяжении 14 дней с момента появления клинической симптоматики заболевания. Именно поэтому для диагностирования текущего инфекционного процесса практикующие специалисты используют серологический скрининг.

Проведение серологического анализа крови на антитела к  Yersinia pseudotuberculosis необходимо при:

  • наличии у пациента признаков острой кишечной инфекции;
  • для подтверждения диагноза при получении отрицательных итоговых данных бактериологического посева;
  • клиническом разграничении инфекционных заболеваний органов пищеварительного тракта;
  • оценивании эффективности курса антибактериальной терапии.

Серологический анализ антител к возбудителю псевдотуберкулеза Отбор образца биологического материала производится в условиях лабораторного центра в утреннее время, натощак. Сложной подготовки к тесту не требуется – накануне процедуры взятия крови из вены пациенту рекомендуется отказаться от курения и употребления спиртного, ограничить пищевую нагрузку и физическую активность, воздержаться от психоэмоционального напряжения.

Для выполнения исследования используют реакцию непрямой (пассивной) гемагглютинации.

Расшифровка анализа

Диагностически значимым считается титр антител 1:100, для детей до 5-ти летнего возраста – 1:50.

Итоговые данные серологического полуколичественного анализа выдаются в значениях:

  • «отрицательно» — опровергает инфицирование пациента Yersinia pseudotuberculosis;
  • «положительно» (4-х кратное и более увеличение титра антител) – свидетельствует о текущем либо перенесенном в недавнем прошлом псевдотуберкулезе.

Результаты анализа оценивают в комплексе с данными эпидемиологической обстановки и клиническими проявлениями. Срок проведения анализа: Добавить в калькулятор

Ответ неверный: почему отличаются результаты тестов на антитела к SARS-CoV-2

Причиной ошибочных результатов тестов на антитела к SARS-CoV-2 может быть не только низкая чувствительность и специфичность систем, но и особенности конкретного организма и время сдачи анализа, рассказали опрошенные «Известиями» эксперты.

Например, есть вероятность получить неверные результаты, если набор антигенов в тесте не попадет в набор антител конкретного человека. Кроме того, система может ошибиться, приняв антитела к другому веществу за искомые, или, наоборот, не распознать антикоронавирусные.

Порой же организм вовсе не вырабатывает антитела к SARS-CoV-2, но у переболевшего появляется клеточный иммунитет, защищающий от COVID-19. Опрошенные «Известиями» специалисты дали советы, как снизить вероятность ошибки.

Добиться ответа

Есть несколько сложностей, сопутствующих тестированию на антитела, и они накладываются друг на друга, рассказали опрошенные «Известиями» эксперты. Во-первых, около 150 зарегистрированных в России тестов имеют различия.

Во-вторых, набор антител, вырабатывающийся при встрече с коронавирусом, индивидуален для каждого переболевшего.

Третья сложность заключается в том, что ученые не знают точный ответ на вопрос, какое время в организме переболевшего остаются антитела.

— Почти все из 150 зарегистрированных в России тестов основаны на детекции S-белка (части коронавируса. — «Известия»), — объяснил руководитель лаборатории геномной инженерии МФТИ Павел Волчков.

— Производителей этих белков в мире не так уж и много. Остальные компании их покупают и делают свои тест-системы. Всё зависит от того, насколько качественно сделаны системы: больше или меньше они кладут этого белка.

От этого зависит чувствительность теста.

Чувствительность и специфичность — основные характеристики систем, уточнил директор центра Genetico Артур Исаев.

— Первый показатель говорит о том, у какого количества переболевших пациентов система выявит антитела, — рассказал эксперт. — Если чувствительность теста низкая, он не выявит антитела, даже если они есть.

Как правило, значения этого параметра в разных системах колеблются в пределах 93–99%. Если у человека есть антитела, но при одном тестировании они «не нашлись», второе тестирование, скорее всего, выявит их.

Иногда анализ дает ложноположительные результаты. Это может случиться потому, что организм успел «познакомиться» и выработать антитела к веществу, похожему на фрагмент SARS-CoV-2. Система может ошибиться и принять такие антитела за антикоронавирусные. Также вероятно, что в использованном тесте набор антигенов не попадет в набор антител конкретного человека.

— В структуре вируса SARS-CoV-2 выделяется несколько антигенов — структур, против которых организм начинает вырабатывать антитела, — пояснил врач-инфекционист «Инвитро» Андрей Поздняков. — Самыми «сильными» в плане ответа иммунной системы человека являются два: нуклеокапсидный и спайковый.

Однако у части пациентов, перенесших подтвержденную коронавирусную инфекцию, обнаруживаются только IgG (класс антител. — «Известия») к спайковому антигену, у других пациентов — IgG к обоим антигенам (и спайковому, и нуклеокапсидному), а еще часть пациентов имеет IgG только к нуклеокапсидному антигену.

Почему так происходит, пока неясно.

Случаи, когда у переболевшего есть антитела только к участкам S-белка или только к частям N-белка, скорее исключения из правила. Обычно, если человек встретился с коронавирусом, у него появляются антитела к его разным участкам.

Тесту время

Даже если человек перенес COVID-19, антитела к моменту тестирования могли уже исчезнуть. Поэтому существует примерный промежуток времени, когда рекомендуют сдавать анализ. Впрочем, даже его соблюдение полностью не гарантирует правильного результата. Слишком индивидуальна реакция организма на COVID-19.

Читайте также:  Как выявить тиреотоксический криз

— Скорость выработки антител и скорость их распада у людей разная, и на это влияет много факторов. Клинически значимо то, что уровень антител превышает определенный показатель — это говорит о том, что гуморальный иммунный ответ есть, — пояснил специалист по лабораторной диагностике инфекционных заболеваний лаборатории «Гемотест» Дмитрий Гордеев.

При подозрении на COVID-19 нужно сдавать тест на антитела IgM к SARS-CoV-2, считают в «Инвитро». Это «молодые» антитела, которые иммунная система начинает вырабатывать в ответ на инфекцию. Причем неважно, в какой клинической форме проявляется болезнь и проявляется ли вообще. С предполагаемого момента заражения должно пройти не более двух недель.

Однако некоторые специалисты уверены, что этот анализ непоказателен.

— Тесты на антитела IgM часто дают ложноположительные результаты, — отметил Артур Исаев. — Сами антитела класса М не очень «специфичные» и обладают меньшим сродством к антигенам вируса, чем класс G. Поэтому тест может среагировать на иные антитела класса M, не имеющие отношения к SARS-Cov-2. Клинического значения этот тест не имеет: слишком высока вариация интерпретации результатов.

Если от предполагаемого момента заболевания прошло больше трех недель, лучше сдавать и IgM, и IgG. Последние антитела представляют собой «архив», где организм хранит информацию о перенесенной инфекции.

Но особенность COVID-19 такова, что иногда оба типа антител обнаруживаются уже спустя три-четыре дня после появления первых симптомов или же, наоборот, выработка антител идет медленно.

Бывает, что их нет вовсе.

Если от момента предполагаемой инфекции прошло больше трех месяцев, рекомендуют сдавать анализ только IgG. Тот же тест советуют, если человек не болел вообще, а просто хочет проверить возможный факт «встречи» с SARS-CoV-2 в виде стертой или бессимптомной форм.

Титр антител не слишком показателен, отметили эксперты. Лучше не пробовать делать по нему какие-либо выводы, а ориентироваться только на качественный результат теста: то есть ответ «да» или «нет».

Антитело не для тела

Не все антитела к SARS-CoV-2 могут нейтрализовать вирус, также обратили внимание специалисты.

— Например, нуклеокапсидные защитить не способны. Они направлены против внутренней структуры вируса и не могут помешать его проникновению в клетку, — сообщил Артур Исаев. — Зато антитела к участку S-белка, так называемому RBD-антигену, как раз защищают от вторжения SARS-CoV-2. Впрочем, не стоит забывать о Т-клеточном иммунитете — он тоже защищает организм.

Уничтожение вируса в организмах некоторых людей происходит за счет не антител, а другой части иммунной системы — Т-лимфоцитов, или Т-клеток. У большинства инфицированных эти клетки способны распознавать фрагменты вируса.

Причем у людей, которые не болели COVID-19, тоже встречаются Т-клетки, которые реагируют на SARS-CoV-2. По мнению ученых, Т-клеточный ответ может наблюдаться из-за того, что активируются клетки иммунологической памяти на другие коронавирусы.

Но есть и другая версия: такие люди перенесли COVID-19 бессимптомно.

Теоретически если анализ на Т-клеточный иммунитет подтверждает его наличие, то с точки зрения иммунологии он должен защищать человека при следующей встрече с SARS-CoV-2. Однако стоит такой тест порядка 20 тыс. рублей. Нацеленные на IgG системы обойдутся на порядок дешевле — примерно 1–1,5 тыс. рублей в частной лаборатории и бесплатно, если сдать анализ в поликлинике по ОМС.

Серологический тест на SARS-CoV-2: поиск и анализ антител к новому коронавирусу

Международный коллектив авторов опубликовал на сервере препринтов medRxiv работу, в которой описал метод детекции антител к SARS-CoV-2 с помощью иммуноферментного анализа.

Для получения антител авторы сконструировали два варианта вирусного белка S (spike, «шип»), распознающего рецептор ACE2 на поверхности клеток человека. Первый вариант — полноразмерный трехсубъединичный белок S, модифицированный для большей стабильности и удобства очистки, а второй — его фрагмент, формирующий с ACE2 непосредственный контакт: рецептор-связывающий домен RBD.

Полученные белки параллельно продуцировали в клетках млекопитающих и насекомых и изучали их способность связываться с вирус-специфическими антителами, полученными из сывороток трех пациентов с различной (от 2 до 20 дней) продолжительностью клинической инфекции.

Все пациенты продуцировали антитела классов IgM, IgA и IgG, демонстрируя классический иммунный ответ к белковым антигенам, включающим иммунитет на слизистых оболочках. Вместе с тем, характер распределения подклассов IgG отличался от спектра IgG при гриппозной инфекции: при SARS-CoV2 доминировали IgG3, тогда как при гриппе наибольшие титры характерны для IgG1.

Полноразмерные антигены закономерно обуславливали более высокий уровень сигнала благодаря наличию большего числа эпитопов.

Для валидации метода авторы исследовали иммунореактивность своих антигенов на образцах сыворотки, собранных в США до начала эпидемии COVID-19 и как содержавших, так и не содержавших антитела к другим вирусам. Во всех случаях, включая сыворотки, полученные от инфицированного достаточно близкородственным коронавирусом NL63, результат был отрицательным, что говорит о высокой специфичности тестирования.

Для чего нужно серологическое исследование образцов при COVID-19? Методы быстрой диагностики инфекционных агентов в настоящее время практически целиком базируются на ПЦР.

Это высокоскоростной (2-5 часов) и высокочувствительный метод: в хорошо отработанном диагностическом наборе чувствительность может достигать нескольких молекул на образец, а новые методики, например, капельная цифровая ПЦР, позволяют обнаруживать и одну молекулу.

Большинство тест-систем для детекции нового коронавируса — а их создано уже немало, списки см., например, здесь и здесь — основаны на ПЦР (как вариант, на изотермической амплификации нуклеиновых кислот).

Методом ПЦР можно идентифицировать, однако, только патоген в активной фазе инфекции. У переболевших вирусные нуклеиновые кислоты обнаружить невозможно: иммунная система уже очистила организм от вируса. Вместе с тем диагностика ранее инфицированных имеет огромное значение: у части заразившихся инфекции протекают в стертой или бессимптомной форме.

Насколько велика доля таких людей среди всех инфицированных, остается неизвестным до тех пор, пока не становится доступен ретроградный анализ. При этом бессимптомные инфицированные могут быть столь же заразными, сколь и пациенты с выраженной симптоматикой.

Отсутствие данных о бессимптомных случаях осложняет эпидемическую ситуацию, искажает картину распространения вируса и данные о смертности от инфекции.

Наиболее эффективный инструмент ретроанализа инфекции — определение антител в крови пациента. Вирус-специфические антитела циркулируют в организме спустя месяцы после элиминации патогена. (Процесс индукции значительных титров антител к патогену принято называть сероконверсией.)

Таким образом, серологические тесты на SARS-CoV-2 (как, например, разработка британской компании Biopanda) дополняют тест-системы на основе ПЦР.

Изучение антител к SARS-CoV-2 не только позволит выявить переболевших в скрытой форме или ответить на вопрос, насколько эффективен иммунный ответ к вирусу.

Не исключено использование теста для выявления гипериммунных выздоровевших с целью использования  антител из донорской крови, нейтрализующих вирус.Авторы напоминают об успешном использовании в Китае для лечения инфицированных SARS-CoV-2 сыворотки выздоровевших пациентов (см.

об этом на PCR.news). При этом высоки риски побочных эффектов и инфекции другими вирусами, такими как ВИЧ, гепатит С, вирус Эпштейна — Барр и цитомегаловирус, однако при критическом сосстоянии пациентов и в отсутствии альтернативы метод все еще применяется. 

Кроме того, при испытаниях прототипа вакцины детекция антител позволяет оценить его эффективность. Фрагмент белка оболочки вируса, связывающий ACE2, может быть использован в качестве аффинной ловушки для получения B-лимфоцитов, потенциально вырабатывающих моноклональные антитела против вируса; это путь к созданию препаратов, блокирующих инфекцию SARS-CoV2. 

Оставьте комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *