Анализ на АТ к 2 – спиральной ДНК: показания, методика, интерпретация результатов

Иммунная система человеческого организма, это страж его здоровья и безопасности.

Как только внутрь проникает враг, формируется иммунный ответ, то есть клетка, которая связывается с пришельцем и уничтожает его, жертвуя своей жизнью, но оставляя после себя последователей, подготовленных к борьбе с этим врагом. Нарушения в этой отлаженной системе вызывают тяжелые заболевания, которые до сих пор являются неизлечимыми.

Обнаружение в сыворотке крови человека повышенный уровень IgG к двуспиральной ДНК дает возможность распознать наличие аутоиммунного заболевания, контролировать процесс развития болезни и эффективность его лечения.

Описание

Анализ на АТ к 2 – спиральной ДНК: показания, методика, интерпретация результатов

Главным характерным признаком аутоиммунных заболеваний, при которых идет самоуничтожение клеток соединительной ткани, является формирование антинуклеарных антител (ANA). Антитела к ДНК — это обособленный класс белков, обладающих способностью проникать и разрушать ядра внутри клеток.

В свое время ANA подразделили на два основных вида:

  • Антитела к гистонам и спирали ДНК, сюда входит патологический белок, вырабатываемый к двойной спирали ДНК, иначе анти – dsDNA.
  • Аутоантитела к ядерным экстрагируемым антигенам. Свое название – экстрагируемые или ENA, эти антигены получили за счет того, что были выделены из ядер клеток солевым раствором. К ним относятся:
    • рибонуклеопротеиды,
    • антигены Шегрена «А» и «В»,
    • SCL-70, и PM-1.

Определение конкретного вида антинуклеарных антител в совокупности с клиническими проявлениями дает возможность установить, каким конкретно аутоиммунным заболеванием поражен больной. Так, выявлено, что обнаружение высоких цифр в крови антитела к ДНК характерно для системной волчанки.

Роль антител к нативной ДНК в развитии красной волчанки

Lupus erythematosus – красная волчанка, известна медицине с 1828 года. Тогда французский дерматолог Laurent Biett впервые описал кожные проявления, появляющиеся при этом недуге. Позже ученые заметили у больных признаки нарушений внутренних органов.

А знаменитый английский терапевт William Osler в 1890 году установил, что в некоторых случаях волчанка может протекать и без изменений на кожных покровах.

Тогда перед практикующими врачами встал вопрос о возможности диагностировать заболевание, опираясь не только на клинические признаки.

Но лишь спустя более 50 лет был открыт феномен LE – клеток, при котором в крови идет образование лейкоцитов, преимущественно нейтрофилов содержащих мертвые фагоцитированные частички ядер, принадлежащих другим клеткам.

И уже к 1954 году в сыворотке больных обнаружили аномальные белки иммунной системы, действия которых были направлены против своих собратьев. Начался новый этап в истории изучения системной волчанки.

Теперь врачи получили возможность достоверной диагностики патологии на ранних стадиях, а так же контроля над развитием симптомов болезни.

Принцип исследования

Анализ на АТ к 2 – спиральной ДНК: показания, методика, интерпретация результатов

Для установления вида системной болезни внутренних соединительных тканей, и дифференциации от других заболеваний важно учитывать специфичность проводимого исследования. Во многих случаях плазма больного может содержать несколько видов агрессивных белков, а большинство тестов рассчитано на подтверждение только одного определенного вида. Специфичность анализа на наличие антител к двуспиральной ДНК составляет 99%, что позволяет по его результатам с высокой точностью диагностировать именно СКВ, даже если тест на ANA показал отрицательные результаты.

Применение в медицине и генетики

Установлено и подтверждено исследованиями, что комплексы, строящиеся из нативной ДНК и иммуноглобулинов к ней, таких как IgG и IgM напрямую формируют симптоматику, характерную для этой болезни, и выражающуюся в разрушении тканей почти всех внутренних органов

Информация о наличии в крови агрессивных агентов важна для пациентов, течение болезни которых протекает без внешних проявлений. Обнаружить аномальные белки к двуспиральной ДНК можно за несколько лет до того как появятся первые признаки разрушений в организме. Такие люди ставятся на учет, и проходят регулярное обследование у ревматолога.

Огромное значение анализ на наличие аномальных клеток к нативной ДНК играет при неонатальной волчанке. Этот вид заболевания может развиваться у новорожденных младенцев, матери которых страдают СКВ или иными иммунными нарушениями. С помощью этого теста врачи могут установить степень риска развития патологий плода, и принять своевременные меры к их устранению.

Опасность такого поражения организма заключается в сбое работы не конкретного органа, а большинства систем организма. Агрессивные белки повреждают суставы, кожу, сосуды и различные внутренние органы.

Чаще подобные проявления наблюдаются именно у женщин, по статистике девять из десяти болеют представительницы прекрасного пола, в возрасте от 15 до 25 лет.

Такой генетический дефект приводит к постепенному, общему ухудшению состояния здоровья. У больных наблюдается:

  • боли в суставах;
    Анализ на АТ к 2 – спиральной ДНК: показания, методика, интерпретация результатовПризнаки красной волчанки
  • повышение температуры тела;
  • покраснение кожи, особенно в области носа, щёк и зоны декольте;
  • слабость;
  • потеря в весе;
  • боль в мышцах;
  • часто возникает стоматит.

Патология нуждается в постоянном контроле со стороны медицинского персонала. Результат её лечения на прямую зависит от запущенности патологического процесса. Чем раньше пациент обратился за квалифицированной помощью, тем больше шансов добиться стойкой ремиссии.

Заболевание носит всегда хронический характер, для его течение характерны периоды обострений и ремиссии. Это ярко отражается на показателях концентрации агрессивного белка.

Высокие цифры подтвердят активность патологического процесса, а снижение титра, говорит о наступлении временного затишья.

Хотя в российской медицине и принято различать течение СКВ по острому и хроническому типу, зарубежные исследования доказывают, что болезнь на сегодняшний день остается неизлечимой.

Показания к назначению и цели исследования

Настоятельно рекомендуется проведение проверки наличия агрессивных белков в таких случаях как:

  • наличие клинических признаков системной волчанки:
    • характерные покраснения кожи на плечах и лице,
    • боли в периферических суставах,
    • признаки почечной недостаточности,
    • приступы эпилепсии.
  • Обнаружение в анализе крови антинуклеарных антител.
  • Для контроля над бессимптомным течением болезни.

Главной целью выявления антител к двуспиральной ДНК является дифференциальная диагностика от диффузных заболеваний другого типа. А так же оценка эффективности проводимого лечения.

 Как любое другое заболевание, волчанка требует к себе внимания и систематического лечения. И, несмотря на то, что патология довольно серьёзная с множественными поражениями внутренних систем организма, бороться с ней вполне возможно.

Своевременное диагностирование с помощью анализа на наличие анти-дсДНК, позволяет контролировать развитие патологической симптоматики, и при грамотном и своевременном медицинском лечении, больные могут вести полноценную жизнь.

Главное верить и безоговорочно выполнять все рекомендации лечащего врача.

Интерпретация диагностических тестов на SARS-CoV-2

Анализ на АТ к 2 – спиральной ДНК: показания, методика, интерпретация результатов

Пандемия коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19) продолжает оказывать свое влияние на весь мир. Знания о диагностических тестах на SARS-CoV-2 по-прежнему расширяются, и крайне важным является понимание смысла этих тестов и правильная интерпретация их данных. Этот материал объясняет, как интерпретировать два типа диагностических тестов, обычно используемых для диагностики инфекции, вызванной SARS-CoV-2 — ПЦР с обратной транскрипцией и ИФА для определения IgG и IgM — и как их результаты могут изменяться с течением времени..

Анализ на АТ к 2 – спиральной ДНК: показания, методика, интерпретация результатов Рисунок 1 | Временные интервалы проведения тестов и показатели выявления вируса взяты из нескольких опубликованных исследований Из-за вариабельности значений в различных исследованиях данные временные интервалы следует считать приблизительными. По этой же причине показана вероятность качественного выявления SARS-CoV-2.a — детекция вероятна только в случае, если пациента активно наблюдают с момента зараженияb — более вероятна фиксация негативного, нежели положительного результата

На сегодняшний день наиболее часто используемый и достоверный тест для диагностики COVID-19 — это ПЦР с обратной транскрипцией. В качестве материала для исследования чаще всего используют мазок из носоглотки или реже другие образцы из верхних дыхательных путей, например, мазок из ротоглотки или слюну.

Производители используют разные целевые гены в структуре РНК, но большинство тестов определяет наличие таких генов, как env, spike (S), ORF1, ген нуклеокапсида (N) и ген РНК-зависимой РНК полимеразы (RdRp).

По данным сравнительного исследования, тесты сопоставимо чувствительны к различным индивидуальным генам; исключение составляет зонд RdRp-SARSr, который обладает меньшей чувствительностью (вероятно, из-за несоответствия нуклеотидов в обратном праймере).

У большинства людей с симптомами коронавирусной инфекции нагрузка вирусной РНК в мазке из носоглотки определяется по порогу числа циклов (cycle treshold, Ct), выявляется со дня появления симптомов и становится максимальной в течение первой недели. Ct — это количество циклов репликации, необходимое для формирования флюоресцентного сигнала.

При этом наименьший показатель Ct соответствует наибольшей нагрузке вирусной РНК. Показатель Ct менее, чем 40, клинически соответствует положительной ПЦР. Этот уровень начинает снижаться к третьей неделе заболевания и вскоре становится неопределяемым.

Читайте также:  Анализ аллергии на лекарство Пенициллин

Показатель Ct у госпитализированных пациентов с тяжелыми случаями инфекции ниже такового при легко протекающих формах; в тяжелых случаях положительная ПЦР может отмечаться более трех недель с момента начала заболевания, тогда как большинство легких случаев в это время будут показывать негативный результат.

Как бы то ни было, положительная ПЦР отражает только присутствие вирусной РНК и не обязательно показывает наличие жизнеспособных вирусов.

В некоторых случаях вирусная РНК определяется методом ПЦР с обратной транскрипцией даже через шесть недель после первого позитивного теста. В нескольких случаях тест был положителен после двух последовательных негативных тестов ПЦР, проведенных с разницей в 24 часа.

Неясно, было это обусловлено ошибкой в исследовании, реинфекцией или реактивацией. В исследовании девяти пациентов попытки изолировать вирус в культуре после восьмого дня с момента начала заболевания не увенчались успехом, что объясняется снижением инфекционных свойств вируса после первой недели.

Отчасти поэтому «стратегия, основанная на симптомах» Центра по контролю и профилактике заболеваний показывает, что «медицинские работники могут приступить к работе, если как минимум три дня (72 часа) прошло с момента выздоровления: отсутствие лихорадки без применения антипиретиков и снижение респираторных симптомов (кашель, затруднение дыхания); и как минимум 10 дней прошло с того момента, как симптомы впервые появились».

Временная шкала изменения результатов ПЦР изменяется, если в качестве образцов используют не мазок из носоглотки. «Позитивность» ПЦР снижается медленнее в мокроте и может быть выявлена даже после того, как мазки из носоглотки уже отрицательны.

В одном исследовании ПЦР была позитивна в образцах кала у 55 из 96 инфицированных пациентов (57 %) и оставалась позитивной после получения отрицательного результата в мазке из носоглотки с медианой 4–11 дней. При этом обнаружение позитивной ПЦР в кале не коррелировало с клинической тяжестью процесса.

По оценкам Wolfel с соавт. длительность выявления положительной ПЦР в мокроте и кале одинакова.

В исследовании 205 пациентов с подтвержденной коронавирусной инфекцией вирусная нагрузка, выявленная ПЦР с обратной транскрипцией, была высокой в образцах, полученных методом бронхоальвеолярного лаважа (93 %), в мокроте (72 %), назофарингеальных мазках (63 %) и глоточных мазках (32 %).

Ложноотрицательные результаты в основном появлялись при несоблюдении временного интервала забора образцов и нарушении техники забора, особенно в случае мазков из носоглотки. Специфичность большинства тестов ПЦР с обратной транскрипцией составляет 100 %, потому что дизайн праймеров высоко специфичен к геномной последовательности SARS-CoV-2.

Случайные ложнопозитивные результаты могут появляться вследствие технических ошибок или контаминации образца.

Анализ на АТ к 2 – спиральной ДНК: показания, методика, интерпретация результатов

Инфицирование коронавирусом также может быть определено непрямым способом — путем исследования иммунного ответа пациента.

Серологический диагноз особенно важен для пациентов с легкими или среднетяжелыми формами, которые могут начать наблюдаться поздно, по прошествии первых двух недель от начала заболевания.

Серологический диагноз также становится важным инструментом для понимания степени распространения COVID-19 в популяции и выявления лиц, иммунизированных и «защищенных» от заражения.

Наиболее чувствительным и ранним серологическим маркером является общий уровень антител. Уровни IgM и IgG начинают нарастать со второй недели с момента появления симптомов; ИФА для их определения обычно становится положительным раньше, на четвертый день после появления симптомов, достигая максимального уровня на 2–3 недели заболевания.

Анализ крови на маркеры системной красной волчанки

Системная красная волчанка (СКВ) — самое распространенное хроническое системное аутоиммунное заболевание, относящееся к группе больших коллагенозов, которое характеризуется диффузным поражением соединительной ткани и сосудов.

Ранняя диагностика этой патологии является серьезной проблемой, так как СКВ может начинаться под «маской» других заболеваний.

Поскольку СКВ является аутоиммунным заболеванием, то механизм его клинических проявлений, согласно современным представлениям, объясняется со следующих позиций:

  • циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), в состав которых входят антиядерные антитела, депонируясь в микроциркуляторном звене, приводят к развитию васкулопатий и повреждению тканей;
  • аутоантитела к клеткам крови приводят к лейко-, лимфотромбопении и анемии;
  • антифосфолипидные антитела приводят к развитию антифосфолипидного синдрома (АФС).

Современные методы иммунологической лабораторной диагностики позволяют идентифицировать все компоненты патогенеза СКВ и тем самым с необыкновенной, практически 100% точностью, верифицировать диагноз заболевания. Вместе с тем наличие любых изменений в анализах позволяет их интерпретировать только с учетом индивидуальной клинической картины.

Следует отметить, что прежний способ диагностики СКВ по наличию в крови LE-клеток не выдержал испытание временем, показав крайне низкую чувствительность и специфичность, в связи с чем от него отказались. LE-клетки даже не включены в систему критериев СКВ.

  • Основными маркерами СКВ являются:
  • Показания для назначения анализа крови на маркеры системной красной волчанки
  • Как проходит процедура?
  • Забор крови осуществляется из локтевой вены натощак утром.
  • Подготовка к анализу

За 8 часов до начала исследования рекомендуется исключить из рациона жирную и жареную пищу, а также алкоголь. Разрешено пить только простую воду.

Волчаночный антикоагулянт

Волчаночный антикоагулянт (ВА, Lupus anticoagulants, LA) один из важных скрининговых и подтверждающих тестов диагностики АФС.

ВА образуются в организме в результате развития аутоиммунных процессов после инфекционных воздействий и подавляют в крови реакцию превращения протромбина в тромбин.

При выявлении этих антител в крови по удлинению коагуляционных тестов, их определяют как «волчаночный антикоагулянт».

Норма волчаночного антикоагулянта
отрицательно

Расшифровка результата анализа

Положительный результат:

Антинуклеарный фактор

Антинуклеарный фактор на клеточной линии НЕр-2 (АНФ HEp-2, титры; ANA IF, titers). Положительный результат АНФ отмечается более чем у 90% больных с СКВ и кожными формами этого заболевания, склеродермии, смешанном заболевании соединительной ткани, синдроме Шегрена.

Результатом определения АНФ является титр, представляющий собой значение конечного разведения сыворотки, при котором сохраняется значимая флюоресценция ядра. Чем выше знаменатель дроби, тем больше разведение сыворотки, тем больше антител в сыворотке больного.

Чувствительность этого теста для СКВ составляет 95%.

Норма антинуклеарного фактора
< 1:160

Расшифровка результат анализа

Высокие титры АНФ (1/640 и выше):

  • высокая вероятность системного ревматического заболевания;
  • высокая вероятность аутоиммунного заболевания печени;
  • повышение титров АНФ в динамике указывает на обострение системного заболевания;
  • при СКВ титр коррелирует с тяжестью заболевания и снижается при эффективной терапии.

Низкие титры АНФ (до 1/160):

Антитела к нуклеосомам

Антитела к нуклеосомам (NCA) являются одними из первых, которые формируются в организме в ходе развития СКВ. Титры NCA коррелируют с активностью заболевания. Специфичность определения данных аутоантител для диагностики СКВ более 95%.

Норма антител к нуклеосомам
< 20 отн. ед/мл

Расшифровка результата анализа

Высокое содержание антител к нуклеосомам (положительно):

  • СКВ;
  • лекарственная волчанка;
  • активная СКВ, сопровождающаяся нефритом.

Низкое содержание антител к нуклеосомам (отрицательно):

  • низкая вероятность СКВ;
  • низкий риск поражения почек при СКВ.

Антитела класса IgG к двуспиральной ДНК

Присутствие антител класса IgG к двуспиральной ДНК (анти-дсДНК IgG; anti-dsDNA IgG) высокоспецифично для СКВ, в меньшей степени — при других диффузных болезнях соединительной ткани или лекарственно-индуцированной СКВ.

Чувствительность теста для СКВ составляет 85%.

Количественное определение анти-дсДНК IgG антител более всего подходит для мониторинга состояния, прогноза и контроля терапии у пациентов СКВ, так как коррелирует с ее активностью и тяжестью гломерулонефрита.

Норма антител класса IgG к двуспиральной ДНК
< 20 МЕ/мл (отрицательно) ≥ 25 МЕ/мл (положительно)
  1. Расшифровка результат анализа
  2. Повышение уровня:
  3. Понижение уровня:

Антитела к кардиолипину IgG

Антитела к кардиолипину IgG (aCL IgG) — один из видов аутоиммунных антифосфолипидных антител, включенных в патогенез антифосфолипидного синдрома. Их наличие в крови манифестируется пролонгированием фосфолипидзависимых тестов коагулограммы (протромбин, АЧТВ), что обозначают как «волчаночный антикоагулянт».

Норма антител к кардиолипину IgG

Антитела к 2-спиральной ДНК

Антитела к 2-спиральной ДНК представляют собой аутоантитела, направленные против собственной двуспиральной ДНК. Данная патология возникает при системной красной волчанке. Исследование применяется для диагностики, оценки активности и мониторинга терапии этой болезни.

Антитела к 2-спиральной ДНК (анти-dsDNA) входят в группу антинуклеарных антител, аутоантител, которые вырабатываются в организме против компонентов собственных ядер.

В отличие от антинуклеарных антител, характерных для многих заболеваний из группы диффузных поражений соединительной ткани, анти-dsDNA являются специфичными для СКВ.

Обнаружение анти-dsDNA считается важным критерием при постановке диагноза СКВ.

Для выявления анти-dsDNA происходит с помощью иммуноферментного анализа. Высокая чувствительность этого теста необходима при исследовании образцов с низкой концентрацией антител.

В связи с тем, что в сыворотке крови пациентов с системными заболеваниями соединительной ткани иногда обнаруживаются сразу несколько разновидностей аутоантител, а очень часто дифференциальная диагностика данных патологий основывается на обнаружении какого-либо определенного вида антител, при выборе лабораторно-диагностического теста необходимо учитывать высокую специфичность иммуноферментного анализа. Специфичность анализа на анти-dsDNA достигает 99,2%, что делает данное исследование незаменимым в дифференциальной диагностике системной красной волчанки.

Читайте также:  Как определить болезнь шегрена

Анти-dsDNA выявляются более чем у 50% пациентов на момент постановки диагноза СКВ.

Считается, что иммунные комплексы, состоящие из 2-спиральной ДНК и специфических к ним антител (иммуноглобулинов класса IgG и IgM), участвуют в развитии микроваскулитов и связанны с развитием симптомов СКВ в виде поражения кожи, почек, суставов и многих других органов.

Анти-dsDNA настолько характерны для СКВ, что при их обнаружении позволяют поставить точный диагноз даже при отрицательном результате скринингового теста на антинуклеарные антитела. Однако необходимо помнить о том, что отсутствие анти-dsDNA не исключает у пациента наличия СКВ.

Выявление анти-dsDNA у пациентов с отсутствием клинических признаков и других критериев данной патологии не трактуется в пользу диагноза СКВ, но такие лица относятся к группе риска развития СКВ в будущем и нуждаются в тщательном мониторинге их состояния у ревматолога, так как появление анти-dsDNA иногда предшествует развитию патологии на протяжении нескольких последующих лет.

Количество анти-dsDNA изменяется в зависимости от особенностей течения заболевания. В большинстве случаев, высокие титры указывают на высокую активность СКВ, а низкие – на период ремиссии.

В связи с этим определение титра анти-dsDNA применяется для мониторинга терапии и составления прогноза заболевания. Повышение уровня указывает на неэффективный контроль болезни, на ее прогрессирование, а также на высокий риск развития люпус-нефрита.

Наоборот, стабильно низкие титры антител считаются хорошим прогностическим признаком. Необходимо отметить, что такая зависимость наблюдается не во всех случаях.

Концентрацию анти-dsDNA необходимо измерять раз 3 или 6 месяцев, в случае легкой степени тяжести СКВ и через более короткие временные промежутки при отсутствии контроля за течением патологии, при подборе терапии, на фоне беременности либо послеродового периода.

Показания

  • Исследование применяется:
  • для диагностики, оценки активности и мониторинга терапии системной красной волчанки;
  • для дифференциальной диагностики диффузных заболеваний соединительной ткани;
  • при выявлении в сыворотке антинуклеарных антител, особенно если получен гомогенный или зернистый (крапчатый) тип иммунофлуоресцентного свечения ядра;
  • для мониторинга состояния пациентов с СКВ каждые 3 или 6 месяцев, при легкой степени тяжести СКВ либо чаще при отсутствии контроля за течением болезни.

Полученные результаты

Референсные значения:

< 10 Ед/мл - не обнаружены.

Предполагаемые болезни

Положительный результат теста может обнаруживаться при системной красной волчанке, синдроме Шегрена, смешанных патологиях соединительной ткани, хроническом гепатите В и С, первичном билиарном циррозе, инфекционном мононуклеозе.

Отрицательный результат возможен при отсутствии у пациента системной красной волчанки и наличии лекарственной волчанки.

Врач-консультант

Данное исследование может быть назначено ревматологом, дермато-венерологом, нефрологом, врачом общей практики.

ANA-профиль (nRNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, Jo-1, CENP B, PCNA, dsDNA, Histones, Ribosomal-P protein, AMA-M2, Nucleosomes), иммуноблоттинг

Код исследования: Е19

Антинуклерные антитела представляют семейство аутоантител, связывающихся с рибонуклеиновыми кислотами и ассоциированными с ними белками.

Они встречаются более чем у 90 % больных с диффузными болезнями соединительной ткани, а также часто отмечаются при аутоиммунных заболеваниях печени и ряде других состояний.

На сегодняшний день охарактеризованы около 200 разновидностей этого семейства аутоантител, но не все они могут быть использованы в клинической практике. 

Иммуноблот антинуклеарных антител позволяет в одном тесте одновременно провести исследование основных разновидностей антинуклеарных антител, что обеспечивает проведение дифференциальной диагностики основных системных ревматических заболеваний.

Каждая разновидность аутоантител, выявляемая с помощью иммуноблота, обычно отмечается у пациентов с характерной клинической картиной, поэтому спектр аутоантител позволяет не только диагностировать заболевание, но и установить риск развития определенных клинических проявлений. 

Иммуноблот антинуклеарных антител целесообразно использовать на втором этапе серологического обследования при положительном результате других тестов, указывающих на присутствие в сыворотке обследуемого антинуклеарных антител. К таким тестам относятся определение антиядерных антител, выявление антинуклеарного фактора (АНФ) на клетках Hep2, антинуклеарных антител. 

Метод иммуноблота антинуклеарных антител в диагностике системных ревматических заболеваний характеризуется высокой клинической специфичностью.

Но специфику антинуклеарных антител даже при высоких титрах АНФ удается установить не всегда, поскольку до сих пор остаются неохарактеризоваными ряд антигенов антинуклеарных антител. Отрицательный результат иммуноблота в этом случае не исключает диагноза системных ревматических заболеваний.

Ряд антинуклеарных антител можно выявить с помощью иммуноблота – панель миозит-специфичных аутоантител и иммуноблота — панель аутоантител при склеродермии.

Подготовка пациента: Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи. Материал: Сыворотка крови. 

Стабильность пробы: В течение 1 недели при t 6-8°C, длительно при замораживании.

Метод: Иммуноблот.

Анализатор: Люминесцентный микроскоп «Euroimmun».

Тест – система: «Euroimmun”.

Референсные значения (норма): Не обнаружено.

  • Основные показания к назначению анализа:1. Системная красная волчанка; 
  • 2. Подострая кожная волчанка и другие разновидности кожной волчанки;
  • 3. Смешанное заболевание соединительной ткани;
  • 4. Синдром Шегрена и ассоциированные заболевания;
  • 5. Диффузная и локализованная склеродермия, CREST синдром;
  • 6. Воспалительные миопатии (полимиозит и дерматомиозит);
  • 7. Ювенильный хронический артрит;
  • 8. Аутоиммунный гепатит;
  • 9. Первичный билиарный цирроз и склерозирующий холангит;

10. Использование данного теста показано при обнаружении высоких титров антинуклеарного фактора, антинуклеарных антител, антител к экстрагируемому ядерному антигену, антител к ДНК, антител к нуклеосомам и антифосфолипидных антител.

Интерпретация результатов: 

Результат определения аутоантител представляется в «крестах» для каждого соответствующего антигена. Увеличение степени серопозитивности косвенно отражает содержание и аффинность аутоантител.

Основные заболевания, связанные с выявлением антинуклеарных антител:

Антиген Значение
Sm (Smith) Специфический маркер системной красной волчанки (входит в 10-ый критерий СКВ Американской коллегии ревматологов, АСR).
SS-A (Ro52) Отмечается при различных аутоиммунных заболеваниях, чаще при системной красной волчанке и ее кожных формах, системных ревматических заболеваниях, ревматоидном артрите, аутоиммунных заболеваниях печени и т.д.
SS-A (Ro60) Системная красная волчанка, кожные формы красной волчанки, фоточувствительность при системной красной волчанке, высокий риск врожденной красной волчанки и поражения сердца плода. Основной серологический показатель при синдроме Шегрена. Нередко отмечается совместно с антителами к SS-A (Ro52) антигену.
SS-B Синдром Шегрена, системная красная волчанка.
PCNA Системная красная волчанка, риск волчаночного нефрита.
Рибосомы (Ribo P) Системная красная волчанка, риск поражения центральной нервной системы.
Нуклеосомы Системная красная волчанка, высокий риск волчаночного гломерулонефрита.
Двуспиральная ДНК Специфический маркер системной красной волчанки (входит в 10-ый критерий СКВ ACR), высокий риск волчаночного нефрита.
snRNP/Sm Смешанное заболевание соединительной ткани, системная красная волчанка с низким риском поражения почек, склеродермия.
Гистоны Системная красная волчанка, лекарственная волчанка, склеродермия.
Scl-70 Системный склероз с диффузным поражением кожи и внутренних органов.
PM-Scl Cклеродермия, сопровождающаяся полимиозитом.
CENT-B CREST синдром со склеродактилией, телангиэктазиями, подкожными кальцинатами, синдромом Рейно, эзофагитом.
Jo-1 Полимиозит в виде антисинтетазного синдрома.
AMA-M2 Первичный билиарный цирроз, синдром Шегрена.

Антиген Значение Sm (Smith) Специфический маркер системной красной волчанки (входит в 10-ый критерий СКВ Американской коллегии ревматологов, АСR).

SS-A (Ro52) Отмечается при различных аутоиммунных заболеваниях, чаще при системной красной волчанке и ее кожных формах, системных ревматических заболеваниях, ревматоидном артрите, аутоиммунных заболеваниях печени и т.д.

SS-A (Ro60) Системная красная волчанка, кожные формы красной волчанки, фоточувствительность при системной красной волчанке, высокий риск врожденной красной волчанки и поражения сердца плода. Основной серологический показатель при синдроме Шегрена. Нередко отмечается совместно с антителами к SS-A (Ro52) антигену.

SS-B Синдром Шегрена, системная красная волчанка. PCNA Системная красная волчанка, риск волчаночного нефрита. Рибосомы (Ribo P) Системная красная волчанка, риск поражения центральной нервной системы. Нуклеосомы Системная красная волчанка, высокий риск волчаночного гломерулонефрита.

Двуспиральная ДНК Специфический маркер системной красной волчанки (входит в 10-ый критерий СКВ ACR), высокий риск волчаночного нефрита. snRNP/Sm Смешанное заболевание соединительной ткани, системная красная волчанка с низким риском поражения почек, склеродермия.

Гистоны Системная красная волчанка, лекарственная волчанка, склеродермия. Scl-70 Системный склероз с диффузным поражением кожи и внутренних органов. PM-Scl Cклеродермия, сопровождающаяся полимиозитом. CENT-B CREST синдром со склеродактилией, телангиэктазиями, подкожными кальцинатами, синдромом Рейно, эзофагитом. Jo-1 Полимиозит в виде антисинтетазного синдрома. AMA-M2 Первичный билиарный цирроз, синдром Шегрена.

Читайте также:  Диагностика аденомы молочной железы

Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг

Антитела к ядерным антигенам (ANA) – это гетерогенная группа аутоантител, направленных против компонентов собственных ядер.

Они являются маркером аутоиммунных заболеваний и определяются для их диагностики, оценки активности и контроля за их лечением.

  • Венозная кровь 
  • до 9 суток
  • Антиядерные антитела, антинуклеарные антитела, антинуклеарный фактор, АНФ.
  • Antinuclear Antibody, ANA, Fluorescent Antinuclear Antibody, FANA, Antinuclear factor, ANF.
  • Иммуноферментный анализ (ИФА).
  • Венозную кровь.
  • Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Антитела к ядерным антигенам (ANA) – это гетерогенная группа аутоантител, направленных против компонентов собственных ядер.

Они выявляются в крови пациентов с разнообразными аутоиммунными заболеваниями, такими как системные заболевания соединительной ткани, аутоиммунный панкреатит и первичный билиарный цирроз, а также с некоторыми злокачественными новообразованиями.

Исследование ANA используется в качестве скрининга аутоиммунных заболеваний у пациента с клиническими признаками аутоиммунного процесса (длительная лихорадка неясного генеза, суставной синдром, кожные высыпания, слабость и др.).

Такие пациенты при положительном результате анализа нуждаются в дальнейшем лабораторном обследовании, включающем более специфичные для каждого аутоиммунного заболевания тесты (например, анти-Scl-70 при подозрении на системную склеродермию, антитела к митохондриям при подозрении на первичный билиарный цирроз). Следует отметить, что отрицательный результат исследования ANA не исключает наличия аутоиммунного заболевания.

ANA наиболее характерны для пациентов с системной красной волчанкой (СКВ). Они обнаруживаются у 98 % больных ею, что позволяет считать это исследование основным тестом для диагностики СКВ.

Высокая чувствительность ANA в отношении СКВ означает, что повторные отрицательные результаты делают диагноз «СКВ» сомнительным. При этом отсутствие ANA полностью не исключает заболевания.

У небольшой части больных ANA отсутствуют на момент появления симптомов СКВ, но возникают в течение первого года болезни. У 2 % больных антитела к ядерным антигенам не выявляются никогда.

При отрицательном результате анализа у пациента с симптомами СКВ целесообразно провести более специфичные для СКВ лабораторные тесты, в первую очередь на антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA). Выявление анти-dsDNA у пациента с клиническими признаками СКВ трактуется в пользу диагноза «СКВ» даже при отсутствии ANA.

СКВ возникает в результате комплекса иммунологических нарушений, развивающихся в течение длительного времени. Степень дисбаланса иммунной системы с течением болезни постепенно нарастает, что находит свое отражение в увеличении спектра аутоантител.

Первый этап аутоиммунного процесса характеризуется наличием генетических особенностей иммунного ответа (например, определенных аллелей главного комплекса гистосовместимости, HLA) в отсутствие отклонений лабораторных исследований. На втором этапе в крови удается выявить аутоантитела, при этом клинических признаков СКВ нет.

Антитела к ядерным антигенам, а также анти-Ro-, анти-La-, антифосфолипидные антитела наиболее часто выявляются на этом этапе. Обнаружение ANA ассоциировано с 40-кратным увеличением риска СКВ. Период между появлением ANA и развитием клинических симптомов бывает разным и составляет в среднем 3,3 года.

Пациенты с положительным результатом анализа на ANA относятся к группе риска по развитию СКВ и нуждаются в периодическом наблюдении у ревматолога и в лабораторном обследовании.

Третий этап аутоиммунного процесса характеризуется появлением симптомов болезни, при этом в крови удается обнаружить наиболее широкий спектр аутоантител, включая анти-Sm-антитела, антитела к двухцепочечной ДНК и рибонуклеопротеину. Таким образом, для получения полной информации о степени иммунологических нарушений при СКВ тест на ANA необходимо дополнять анализом на другие аутоантитела.

Течение СКВ варьируется от стойкой ремиссии до фульминантного люпус-нефрита. Чтобы дать прогноз заболевания, оценить его активность и эффективность лечения, используют различные клинические и лабораторные критерии.

Так как ни один из тестов не позволяет однозначно предсказать обострение или поражение внутренних органов, мониторинг СКВ – это всегда комплексная оценка, включающая исследование ANA, а также других аутоантител и некоторых общеклинических показателей.

На практике врач самостоятельно определяет набор тестов, наиболее точно отражающих, как изменяется течение заболевания у каждого пациента.

Особый клинический синдром представляет лекарственная волчанка.

Она развивается на фоне приема некоторых лекарственных препаратов (чаще всего прокаинамида, гидралазина, некоторых ингибиторов АПФ и бета-блокаторов, изониазида, миноциклина, сульфасалазина, гидрохлортиазида и др.) и характеризуется симптомами, напоминающими СКВ.

В крови большинства пациентов с лекарственной волчанкой также удается выявить ANA. При симптомах аутоиммунного процесса у пациента, принимающего эти препараты, рекомендуется анализ на ANA, чтобы исключить лекарственную волчанку.

Особенность лекарственной волчанки заключается в исчезновении иммунологических нарушений и симптомов болезни после полной отмены препарата – в это время рекомендуется контрольное исследование ANA, и отрицательный результат подтверждает диагноз «лекарственная волчанка».

ANA выявляются у 3-5 % здоровых людей (в группе пациентов старше 65 лет эта цифра может достигать 10-37 %). Положительный результат у пациента без симптомов аутоиммунного процесса необходимо интерпретировать с учетом дополнительных анамнестических, клинических и лабораторных данных.

  • Для скрининга аутоиммунных заболеваний, таких как системные заболевания соединительной ткани, аутоиммунный гепатит, первичный билиарный цирроз и др.
  • Для диагностики системной красной волчанки, оценки ее активности, составления прогноза и контроля за ее лечением.
  • Для диагностики лекарственной волчанки.
  • При симптомах аутоиммунного процесса: длительной лихорадке неясного генеза, болях в суставах, кожной сыпи, немотивированной утомляемости и др.
  • При симптомах системной красной волчанки (лихорадка, поражения кожи), артралгий/артрита, пневмонита, перикардита, эпилепсии, поражения почек.
  • Каждые 6 месяцев или чаще при обследовании пациента с диагнозом «СКВ».
  • При назначении прокаинамида, дизопирамида, пропафенона, гидралазина и других лекарственных препаратов, ассоциированных с развитием лекарственной волчанки.

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

  • системная красная волчанка;
  • аутоиммунный панкреатит;
  • аутоиммунные заболевания щитовидной железы;
  • злокачественные новообразования печени и легких;
  • полимиозит/дерматомиозит;
  • аутоиммунный гепатит;
  • смешанное заболевание соединительной ткани;
  • миастения;
  • диффузный интерстициальный фиброз;
  • синдром Рейно;
  • ревматоидный артрит;
  • системная склеродермия;
  • синдром Шегрена;
  • прием таких лекарств, как прокаинамид, дизопирамид, пропафенон, некоторые ингибиторы АПФ, бета-блокаторы, гидралазин, пропилтиоурацил, хлорпромазин, литий, карбамазепин, фенитоин, изониазид, миноциклин, гидрохлортиазид, ловастатин, симвастатин.

Причины отрицательного результата:

  • норма;
  • неправильное взятие биоматериала на исследование.
  • Уремия может приводить к ложноотрицательному результату.
  • Многие лекарственные препараты ассоциированы с развитием лекарственной волчанки и появлением ANA в крови.
  • Отрицательный результат у пациента с признаками аутоиммунного процесса не исключает наличия аутоиммунного заболевания.
  • ANA выявляются у 3-5 % здоровых людей (10-37 % в возрасте старше 65 лет).
  • Положительный результат у пациента без симптомов аутоиммунного процесса необходимо интерпретировать с учетом дополнительных анамнестических, клинических и лабораторных данных (риск СКВ у таких пациентов увеличен в 40 раз).
  • Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
  • Лейкоцитарная формула
  • Общий анализ мочи с микроскопией осадка
  • Креатинин в сыворотке
  • Альбумин в сыворотке
  • С3 компонент комплемента
  • Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
  • Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
  • Билирубин общий
  • Скрининг болезней соединительной ткани
  • Антитела к экстрагируемому ядерному антигену (ENA-скрин)
  • Антинуклеарные антитела (анти-Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот
  • Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA), скрининг
  • Диагностика системной красной волчанки
  • Антифосфолипидные антитела IgG
  • Антифосфолипидные антитела IgM
  • Диагностика антифосфолипидного синдрома (АФС)

Ревматолог, дерматовенеролог, нефролог, педиатр, врач общей практики.

Тип На дому В Центре Самостоятельно
Венозная кровь да да

На дому: возможно взятие биоматериала сотрудником мобильной службы.

В Диагностическом центре: взятие, либо самостоятельный сбор биоматериала осуществляется в Диагностическом центре.

Самостоятельно: сбор биоматериала осуществляется самим пациентом (моча, кал, мокрота и т.п.). Другой вариант – образцы биоматериала предоставляет пациенту врач (например, операционный материал, ликвор, биоптаты и т.п.). После получения образцов пациент может как самостоятельно доставить их в Диагностический центр, так и вызвать мобильную службу на дом для передачи их в лабораторию.

  • Arbuckle MR, McClain MT, Rubertone MV, Scofield RH, Dennis GJ, James JA, Harley JB. Development of autoantibodies before the clinical onset of systemic lupus erythematosus. N Engl J Med. 2003 Oct 16;349(16):1526-33.
  • Bizzaro N, Tozzoli R, Shoenfeld Y. Are we at a stage to predict autoimmune rheumatic diseases? Arthritis Rheum. 2007 Jun;56(6):1736-44.
  • Guidelines for referral and management of systemic lupus erythematosus in adults. American College of Rheumatology Ad Hoc Committee on Systemic Lupus Erythematosus Guidelines. Arthritis Rheum. 1999 Sep;42(9):1785-96.
  • Fauci et al. Harrison's Principles of Internal Medicine/A. Fauci, D. Kasper, D. Longo, E. Braunwald, S. Hauser, J. L. Jameson, J. Loscalzo; 17 ed. – The McGraw-Hill Companies, 2008.

Оставьте комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *